相信有很多小伙伴會好奇逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝服務是用來干嘛的呢？下面跟著小編一起去看看吧！病毒載體是人為調(diào)節(jié)細胞內(nèi)或機體內(nèi)基因表達常用的方式之一，通過病毒感染的方式可以將外源的基因片段穩(wěn)定整合到宿主細胞基因組內(nèi)，從而達到持續(xù)、穩(wěn)定的表達外源基因的目的。
什么是逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝服務：
10cm大皿接種5×106個Plat-E細胞，加入10ml含10%FBS的DMEM培養(yǎng)基過夜，12h后顯微鏡下觀察細胞密度80%-90%為宜。15ug目的質(zhì)粒和500ulOpti-MEM培養(yǎng)基混合，同時45ug轉(zhuǎn)染試劑和500ulOpti-MEM培養(yǎng)基混合，5min后轉(zhuǎn)染試劑Opti-MEM加至質(zhì)粒Opti-MEM中，靜置20min，將混合物滴入Plat-E細胞中混勻，37℃5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，8-10h后更換新鮮DMEM培養(yǎng)基。轉(zhuǎn)染48h，72h后收集病毒上清，0.44um濾器過濾-80℃保存。
慢病毒（Lentivirus）是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種，它能夠?qū)谢驅(qū)氲揭恍┹^難轉(zhuǎn)染的細胞，如原代細胞等，并且將靶基因隨機整合到宿主的基因組中，從而大大增加了轉(zhuǎn)染效率，并且能夠在細胞系中穩(wěn)定表達若干代，可以進行穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株的篩選。因為是隨機整合，也有不確定因素，有些公司還能提供定點整合技術(shù)，將靶基因定點整合到基因組特定的部位，從而保證其高效表達并且對細胞不產(chǎn)生隨機整合可能產(chǎn)生的傷害。
慢病毒載體基因組是正鏈RNA，其基因組進入細胞后，在細胞漿中被其自身攜帶的逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄為DNA，形成DNA整合前復合體，進入細胞核后，DNA整合到細胞基因組中。整合后的DNA轉(zhuǎn)錄mRNA，回到細胞漿中，表達目的蛋白或產(chǎn)生RNAi干擾。
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